Efecto de la infección con Trypanosoma cruzi en la evolución de enfermedades metabólicas inducidas por una dieta grasa : parámetros bioquímicos y respuesta inmune innata y adaptativa

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2014La enfermedad de Chagas causada por el parásito protozoario Trypanosoma cruz¡ es una de las causas principales de enfermedades cardíacas en las zonas endémicas de América Latina, pero en los últimos años las migraciones de personas han favorecido su difusión en los países no endémicos. La persistencia del parásito eventualmente resulta en graves complicaciones en los tejidos cardíaco y gastrointestinal, aunque este protozoo también infecta el hígado y el bazo. La esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) constituye un problema de salud importante junto con el aumento de incidencia de la obesidad y la diabetes en el mundo y se caracteriza por la presencia de esteatosis, inflamación y lesión de los hepatocitos. Los receptores de la inmunidad innata tipo Toll (TLR) y las citoquinas juegan un papel crucial en el clearence de patógenos, así como en la aparición de la esteatohepatitis. Los mecanismos inmunológicos que subyacen al modelo de EHNA experimental y más interesante el efecto de T cruz¡ en la patogénesis de este trastorno metabólico no han sido dilucidados. En esta tesis evaluamos diferentes parámetros inmunológicos en ratones machos C57BL/6 de tipo salvaje (WT) y deficientes en el receptor tipo toll 4 (TLR4-I-) alimentados con una dieta estándar baja en grasa, DC (3% de la grasa) como grupo control, o una dieta media en grasas (DG) que contiene 14% de grasa con el fin de inducir EHNA, o ratones infectados por vía intraperitoneal con 100 tripomastigotes de la cepa Tulahuen y alimentados a la vez con DC (I+DC) o DG (I+DG) por 24 semanas. Los experimentos demostraron que la DG indujo EHNA en ratones WT y la infección parasitaria generó marcados cambios metabólicos como la reducción del peso corporal y de la esteatosis forjada por la DG. A su vez, el T cruz¡ en la fase crónica mejoró la resistencia a la insulina evaluada mediante el cálculo del índice del modelo homeostático de evaluación de la resistencia a la insulina (HOMA-IR), pero provocó un aumento de los triglicéridos en plasma y los niveles de colesterol. Macrófagos inflamatorios Ml y células T citotóxicas aisladas de leucocitos intra-hepáticos de animales DG y de grupos infectados mostraron una gran producción de citoquinas inflamatorias intracelulares, asociadas con altos niveles de citoquinas plasmáticas, tales como IL-6, IFNy e 1L17 y la quimiocina CCL2 en comparación con el grupo DC WT. El reclutamiento de linfocitos B, células NK y dendríticas en hígado fue incrementada por la DG y se intensificó por la infección parasitaria. Estos resultados fueron dependientes de la señalización por TLR4. Las especies reactivas de oxígeno (ERO) y peroxinitritos producidos por leucocitos inflamatorios del hígado del grupo DG también se vieron exacerbadas por la infección parasitaria en nuestro modelo de EHNA. En este escenario también se analizaron las modificaciones generadas en la arteria principal, la aorta. En nuestro modelo si bien no encontramos lesiones ateroscleróticas graves, se observaron alteraciones e inflamación en la adventicia en los grupos tratados vs. DC, los cuales podrían favorecer a la aparición de eventos tardíos relacionados a esta patología cardiovascular. Los resultados obtenidos podrían ser extrapolados a la población humana, debido a que la infección en la fase crónica por T. cruz¡ presenta efectos sistémicos y locales de riesgo pro-aterogénico, lo que podría incidir en la morbilidad y mortalidad de personas con enfermedad de Chagas crónica. Estos hallazgos brindarían nueva información sobre el desarrollo de la aterosclerosis y de la EHNA en condiciones no forzadas, y su relación con la inflamación y la infección, además de tener consecuencias para la enfermedad de Chagas. En este sentido, las elevadas parasitemias en la etapa aguda de la enfermedad, la mayor carga parasitaria en hígado y aorta en la fase crónica y la menor sobrevida en el grupo I+DG vs. I+DC, sostienen la hipótesis de que el exceso de calorías provenientes de grasas en la dieta, es un importante factor de riesgo para determinar la gravedad de la enfermedad parasitaria. Nuestros resultados también sugieren un efecto sinérgico entre el daño asociado con patrones moleculares generados durante el proceso infeccioso y la esteatohepatitis, revelando una intensa comunicación entre los tejidos metabólicamente activos, tales como el hígado y el sistema inmune. Así, la infección por T cruz¡ debe ser considerada como un factor de riesgo adicional, ya que exacerba la inflamación y acelera el desarrollo de la lesión hepática y aórtica. Estos hallazgos pueden proporcionar una nueva visión para la esteatohepatitis asociada a la tripanosomiasis americana.Fil: Onofrio, Luisina Inés. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina

Chronic Trypanosoma cruzi infection potentiates adipose tissue macrophage polarization toward an anti-inflammatory M2 phenotype and contributes to diabetes progression in a diet-induced obesity model

Chronic obesity and Chagas disease (caused by the protozoan Trypanosoma cruzi) represent serious public health concerns. The interrelation between parasite infection, adipose tissue, immune system and metabolism in an obesogenic context, has not been entirely explored. A novel diet-induced obesity model (DIO) was developed in C57BL/6 wild type mice to examine the effect of chronic infection (DIO+I) on metabolic parameters and on obesity-related disorders. Dyslipidemia, hyperleptinemia, and cardiac/hepatic steatosis were strongly developed in DIO mice. Strikingly, although these metabolic alterations were collectively improved by infection, plasmatic apoB100 levels remain significantly increased in DIO+I, suggesting the presence of pro-atherogenic small and dense LDL particles. Moreover, acute insulin resistance followed by chronic hyperglycemia with hypoinsulinemia was found, evidencing an infection-related-diabetes progression. These lipid and glucose metabolic changes seemed to be highly dependent on TLR4 expression since TLR4-/- mice were protected from obesity and its complications. Notably, chronic infection promoted a strong increase in MCP-1 producing macrophages with a M2 (F4/80+CD11c-CD206+) phenotype associated to oxidative stress in visceral adipose tissue of DIO+I mice. Importantly, infection reduced lipid content but intensified inflammatory infiltrates in target tissues. Thus, parasite persistence in an obesogenic environment and the resulting host immunometabolic dysregulation may contribute to diabetes/atherosclerosis progression.Fil: Cabalén, María Eugenia. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Cabral, Maria Fernanda. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Sanmarco, Liliana Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Andrada, Marta Cecilia. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Onofrio, Luisina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Ponce, Nicolás Eric. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Aoki, Maria del Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Gea, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Cano, Roxana Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Trypanosoma cruzi Infection Is a Potent Risk Factor for Non-alcoholic Steatohepatitis Enhancing Local and Systemic Inflammation Associated with Strong Oxidative Stress and Metabolic Disorders

The immune mechanisms underlying experimental non-alcoholic steatohepatitis (NASH), and more interestingly, the effect of T. cruzi chronic infection on the pathogenesis of this metabolic disorder are not completely understood. We evaluated immunological parameters in male C57BL/6 wild type and TLR4 deficient mice fed with a standard, low fat diet, LFD (3% fat) as control group, or a medium fat diet, MFD (14% fat) in order to induce NASH, or mice infected intraperitoneally with 100 blood-derived trypomastigotes of Tulahuen strain and also fed with LFD (I+LFD) or MFD (I+MFD) for 24 weeks. We demonstrated that MFD by itself was able to induce NASH in WT mice and that parasitic infection induced marked metabolic changes with reduction of body weight and steatosis revealed by histological studies. The I+MFD group also improved insulin resistance, demonstrated by homeostasis model assessment of insulin resistance (HOMA-IR) analysis; although parasitic infection increased the triglycerides and cholesterol plasma levels. In addition, hepatic M1 inflammatory macrophages and cytotoxic T cells showed intracellular inflammatory cytokines which were associated with high levels of IL6, IFNγ and IL17 plasmatic cytokines and CCL2 chemokine. These findings correlated with an increase in hepatic parasite load in I+MFD group demonstrated by qPCR assays. The recruitment of hepatic B lymphocytes, NK and dendritic cells was enhanced by MFD, and it was intensified by parasitic infection. These results were TLR4 signaling dependent. Flow cytometry and confocal microscopy analysis demonstrated that the reactive oxygen species and peroxinitrites produced by liver inflammatory leukocytes of MFD group were also exacerbated by parasitic infection in our NASH model. We highlight that a medium fat diet by itself is able to induce steatohepatitis. Our results also suggest a synergic effect between damage associated with molecular patterns generated during NASH and parasitic infection, revealing an intense cross-talk between metabolically active tissues, such as the liver, and the immune system. Thus, T. cruzi infection must be considered as an additional risk factor since exacerbates the inflammation and accelerates the development of hepatic injury.Fil: Onofrio, Luisina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Arocena, Alfredo Raul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Paroli, Augusto Fabián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Cabalén, María Eugenia. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Andrada, Marta Cecilia. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cano, Roxana Carolina. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Gea, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Efecto de la infección in vivo con trypanosoma cruzi y una dieta rica en lípidos sobre receptores toll-like en un modelo experimental de ateroesclerosis

Ateroesclerosis es una enfermedad inflamatoria crónica de arterias de mediano y gran calibre, caracterizada por activación de células endoteliales, reclutamiento de monocitos en la pared de los vasos y diferenciación de macrófagos en células espumosas cargadas de colesterol. Además de los factores de riesgo convencionales y mejor conocidos que predisponen a la ateroesclerosis, como la hiperlipemia, hipertensión y el hábito de fumar, recientemente se ha propuesto a las infecciones y la inflamación como factores de riesgo a considerar en su desarrollo. Algunas infecciones bacterianas o virales pueden ejercer una acción pro-aterogénica, probablemente como consecuencia de inflamación sistémica o un efecto directo sobre la pared vascular. Sin embargo, el papel del Trypanosoma cruzi ha sido escasamente explorado. Como objetivo principal nos propusimos, estudiar la influencia de la infección in vivo con Trypanosoma. cruzi (parásito protozoario, agente etiológico de la Enfermedad de Chagas ) más una dieta rica en lípidos sobre la expresión de los receptores tipo Toll de la inmunidad innata en un modelo experimental en ratones C57BL/6 salvajes, propensos al desarrollo de ateroesclerosis. Especifícamente, nos interesa caracterizar que tipos celulares infiltran el corazón y aorta de los animales sometidos a tratamiento experimental, el perfil de citoquinas inflamatorias séricas, quimioquinas y moléculas de adhesión intercelular, así como también establecer una correlación con parámetros bioquímicos-clínicos y endocrinológicos, en especial el perfil de lípidos, lipoproteínas y apolipoproteínas, marcadores de inflamación sistémica, peso corporal, glucemia, insulina e insulino-resistencia.Fil: Cano, Roxana Carolina. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Efecto de la infección in vivo con trypanosoma cruzi y una dieta rica en lípidos sobre receptores toll-like en un modelo experimental de ateroesclerosis

Ateroesclerosis es una enfermedad inflamatoria crónica de arterias de mediano y gran calibre, caracterizada por activación de células endoteliales, reclutamiento de monocitos en la pared de los vasos y diferenciación de macrófagos en células espumosas cargadas de colesterol. Además de los factores de riesgo convencionales y mejor conocidos que predisponen a la ateroesclerosis, como la hiperlipemia, hipertensión y el hábito de fumar, recientemente se ha propuesto a las infecciones y la inflamación como factores de riesgo a considerar en su desarrollo. Algunas infecciones bacterianas o virales pueden ejercer una acción pro-aterogénica, probablemente como consecuencia de inflamación sistémica o un efecto directo sobre la pared vascular. Sin embargo, el papel del Trypanosoma cruzi ha sido escasamente explorado. Como objetivo principal nos propusimos, estudiar la influencia de la infección in vivo con Trypanosoma. cruzi (parásito protozoario, agente etiológico de la Enfermedad de Chagas ) más una dieta rica en lípidos sobre la expresión de los receptores tipo Toll de la inmunidad innata en un modelo experimental en ratones C57BL/6 salvajes, propensos al desarrollo de ateroesclerosis. Especifícamente, nos interesa caracterizar que tipos celulares infiltran el corazón y aorta de los animales sometidos a tratamiento experimental, el perfil de citoquinas inflamatorias séricas, quimioquinas y moléculas de adhesión intercelular, así como también establecer una correlación con parámetros bioquímicos-clínicos y endocrinológicos, en especial el perfil de lípidos, lipoproteínas y apolipoproteínas, marcadores de inflamación sistémica, peso corporal, glucemia, insulina e insulino-resistencia.Fil: Cano, Roxana Carolina. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Efecto de la infección con trypanosoma cruzi y nutrición sobre receptores de la inmunidad innata, adipocinas y otros mediadores de inflamación asociados a la obesidad en modelos experimentales.

Este proyecto pretende dilucidar el efecto de infección con Trypanosoma cruzi y dieta hipergrasa/fructosa en la génesis de obesidad e insulino-resistencia y su impacto sobre la aterosclerosis. Esto se abordará en modelos de obesidad in vivo e in vitro, estudiando receptores de inmunidad innata, citocinas/quimiocina, adipocinas y mediadores inflamatorios que participarían en la patogénesis de este proceso, focalizando en tejido graso visceral y adipositos en cultivo celular. Esta investigación avanzaría en el conocimiento de la patogénesis inflamatoria de ateroesclerosis y aportaría bases para sustentar nuevas estrategias terapéuticas destinadas a minimizar las complicaciones cardiovasculares de la obesidad y sus co-morbilidades, entre ellas, la aterosclerosis, una enfermedad devastadora. En el modelo in vivo en ratones machos C57BL/6 salvajes tratados con streptozotocina y alimentados con una dieta hipergrasa/fructosa se inducirá obesidad (IR) y DM2, para: 1- Investigar la influencia de la infección con Trypanosoma cruzi como un potencial factor sinérgico pro-aterogénico. Se evaluará a distintos tiempos post infección, tejido adiposo visceral y repercusiones en aorta y corazón, por histopatología. Se determinará el perfil de lípidos, lipoproteínas y parámetros metabólicos: glucosa/insulina e índice HOMA-IR. Asimismo, se evaluarán ácidos grasos libres y proteínas de fase aguda circulantes como respuesta al proceso inflamatorio. 2- Evaluar la expresión de receptores tipo Toll y scavenger (CD36) en el tejido adiposo visceral y aorta principalmente e identificar los tipos celulares que participan en las lesiones. 3- Determinar las citocinas inflamatorias: TNFalfa, IL1beta, IL12 e IL6 y la quimiocina atractante de monocitos y adipocinas (leptina y adiponectina) en plasma y mediadores inflamatorios:óxido nítrico, especies reactivas del oxígeno y metaloproteasas en adipositos viscerales y aorta. Se cuantificarán moléculas de adhesión intercelular ICAM-1 y VCAM-1. In vitro proponemos: 1- Investigar la influencia de infección con T. cruzi y ácidos grasos saturados/ monoinsaturado y el efecto de LDL oxidadas/agregadas frente a LDL nativas en una línea celular de adipositos. Se estudiará la expresión basal y post-estímulo de receptores innatos tipo Toll y CD 36. 2- Cuantificar adipocinas pro- inflamatorias y antiinflamatorias en sobrenadantes de cultivos frente a estímulos propuestos y la expresión de ICAM-1 y VCAM-1

Efecto de la infección in vivo con Trypanosoma cruzi y una dieta rica en lípidos sobre receptores Toll-like en un modelo experimental de Aterosclerosis

Además de los factores de riesgos convencionales y mejor conocidos que predisponen a la aterosclerosis, entre ellos, la hiperlipemia, hipertensión y el hábito de fumar, recientemente se ha propuesto a las infecciones y la inflamación como factores de riesgo a tener en cuenta en el desarrollo de esta patología. Considerando que algunas infecciones bacterianas y / o virales pueden ejercer una acción pro-aterogénica, probablemente como consecuencia de inflamación sistémica o un efecto directo sobre la pared vascular, nos propusimos como objetivo principal, estudiar la influencia de la infección in vivo con Trypanosoma cruzi (parásito protozoario, agente etiológico de la Enfermedad de Chagas) más una dieta rica en lípidos sobre la expresión de los receptores de la inmunidad innata (Toll – like) en un modelo experimental desarrollado en ratones C57BL/6, propensos a la aterosclerosis. Por otra parte, nos interesa caracterizar los tipos celulares que infiltran el corazón y la aorta de los animales sometidos a tratamientos experimental (mediante estudios inmunohistoquímicos), el perfil de citoquinas inflamatorias séricas y moléculas de adhesión intercelular, así como también establecer una correlación con parámetros bioquímico – clínicos y endocrinológicos, en especial el perfil de lípidos, lipoproteínas y apolipoproteínas, marcadores de inflamación sistémica, peso corporal, glucemia, insulina e insulina resistenciaFil: Cano, Roxana Carolina. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Andrada, Marta Cecilia. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Inhibitory Receptor Expression on T Cells as a Marker of Disease Activity and Target to Regulate Effector Cellular Responses in Rheumatoid Arthritis

Objective: Inhibitory receptors are essential for the regulation of effector immune responses and may play critical roles in autoimmune diseases. We evaluated whether inhibitory receptor expression on T cells from patients with rheumatoid arthritis (RA) were correlated with immune activation, disease activity, and response to treatment, as well as whether inhibitory receptor–mediated pathways were functional. Methods: Using flow cytometry, we performed extensive phenotypic and functional evaluation of CD4+ and CD8+ T cells from the blood and synovial fluid (SF) of RA patients ex vivo and after culture. The relationship of each parameter with the Disease Activity Score in 28 joints using the erythrocyte sedimentation rate (DAS28-ESR) and response to treatment was examined. Results: In RA patients with low levels of T cell activation, inhibitory receptor expression showed an inverse relationship with the DAS28-ESR. The frequency of T cells expressing multiple inhibitory receptors was reduced in untreated RA patients but returned to normal levels in treated patients. RA patients who responded to treatment showed an augmented frequency of inhibitory receptor–expressing T cells that correlated with reduced inflammatory cytokine production in comparison to nonresponders. Higher frequencies of effector and memory T cells that expressed multiple inhibitory receptors were seen in SF than in peripheral blood. Notably, inhibitory pathways were operative in blood and synovial T cells from all RA patients, although cells from nonresponder patients were less sensitive to inhibition. Conclusion: Inhibitory receptor expression on T cells from RA patients is inversely correlated with effector T cell function and disease activity and may predict response to treatment. Furthermore, different inhibitory pathways are functional and cooperatively suppress synovial T cells, providing a rationale for new treatment strategies to regulate acute local inflammation.Fil: Onofrio, Luisina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Zacca, Estefanía. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Ferrero, Paola Virginia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Acosta, Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Mussano, Eduardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Onetti, Laura. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Cadile, Isaac. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Gazzoni, M. Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Jurado, Raúl. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Tosello Boari, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Ramello, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Montes, Carolina Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Gruppi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Acosta Rodriguez, Eva Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Efecto de la infección con trypanosoma cruzi y nutrición sobre receptores de la inmunidad innata, adipocinas y otros mediadores de inflamación asociados a la obesidad en modelos experimentales

Este proyecto pretende dilucidar el efecto de infección con Trypanosoma cruzi y dieta hipergrasa/fructosa en la génesis de obesidad e insulino-resistencia y su impacto sobre la aterosclerosis. Esto se abordará en modelos de obesidad in vivo e in vitro, estudiando receptores de inmunidad innata, citocinas/quimiocina, adipocinas y mediadores inflamatorios que participarían en la patogénesis de este proceso, focalizando en tejido graso visceral y adipositos en cultivo celular. Esta investigación avanzaría en el conocimiento de la patogénesis inflamatoria de ateroesclerosis y aportaría bases para sustentar nuevas estrategias terapéuticas destinadas a minimizar las complicaciones cardiovasculares de la obesidad y sus co-morbilidades, entre ellas, la aterosclerosis, una enfermedad devastadora. En el modelo in vivo en ratones machos C57BL/6 salvajes tratados con streptozotocina y alimentados con una dieta hipergrasa/fructosa se inducirá obesidad (IR) y DM2, para: 1- Investigar la influencia de la infección con Trypanosoma cruzi como un potencial factor sinérgico pro-aterogénico. Se evaluará a distintos tiempos post infección, tejido adiposo visceral y repercusiones en aorta y corazón, por histopatología. Se determinará el perfil de lípidos, lipoproteínas y parámetros metabólicos: glucosa/insulina e índice HOMA-IR. Asimismo, se evaluarán ácidos grasos libres y proteínas de fase aguda circulantes como respuesta al proceso inflamatorio. 2- Evaluar la expresión de receptores tipo Toll y scavenger (CD36) en el tejido adiposo visceral y aorta principalmente e identificar los tipos celulares que participan en las lesiones. 3- Determinar las citocinas inflamatorias: TNFalfa, IL1beta, IL12 e IL6 y la quimiocina atractante de monocitos y adipocinas (leptina y adiponectina) en plasma y mediadores inflamatorios:óxido nítrico, especies reactivas del oxígeno y metaloproteasas en adipositos viscerales y aorta. Se cuantificarán moléculas de adhesión intercelular ICAM-1 y VCAM-1. In vitro proponemos: 1- Investigar la influencia de infección con T. cruzi y ácidos grasos saturados/ monoinsaturado y el efecto de LDL oxidadas/agregadas frente a LDL nativas en una línea celular de adipositos. Se estudiará la expresión basal y post-estímulo de receptores innatos tipo Toll y CD 36. 2- Cuantificar adipocinas pro- inflamatorias y antiinflamatorias en sobrenadantes de cultivos frente a estímulos propuestos y la expresión de ICAM-1 y VCAM-1.Fil: Cano, Roxana Carolina. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Cabalén, María Eugenia. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Cabral, María Fernanda. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

PD-L1+ Regulatory B Cells Are Significantly Decreased in Rheumatoid Arthritis Patients and Increase After Successful Treatment

Background: B cells play an important role in the development and maintenance of rheumatoid arthritis (RA). Although IL-10–producing B cells represent a major subset of regulatory B cells (Bregs) able to suppress autoimmune and inflammatory responses, recent reports showed that B cell-mediated immune suppression may also occur independent of IL-10. For instance, B cells can modulate T cell immune responses through the expression of regulatory molecules such as PD-L1. So far, PD-L1-expressing B cells have not been analyzed in RA patients.Objective: To analyze the frequency of PD-L1-expressing B cells in the peripheral blood of RA patients compared to healthy controls (HC) matched for sex and age, their function on T cell response and their changes in response to therapy.Methods: Fresh peripheral blood B cells from RA patients and HC were characterized by flow cytometry and their functionality assessed in a co-culture system with autologous T cells.Results: The frequencies of CD19+PD-L1+ B cells, CD24hiCD38−PD-L1+ and CD24hiCD38hiPD-L1+ B cells were significantly lower in untreated RA patients than in HC. In a follow-up study, the frequencies of PD-L1+ B cells (CD19+PD-L1+ B cells, CD24hiCD38−PD-L1+ and CD24hiCD38hiPD-L1+ B cells) increased significantly after treatment in good responder patients, although the frequency of total CD24hiCD38hi B cells decreased. CD19+ B cells from untreated RA patients and HC upregulated PD-L1 expression similarly upon stimulation with CpG plus IL-2 and were able to suppress, in vitro, CD8+ T cell proliferation and cytokine production in a PD-L1-dependent manner.Conclusions: Our results show that PD-L1+ B cells exhibiting T cell suppressive capacity are significantly decreased in untreated RA patients but increase in response to successful treatment. PD-L1 expression on B cells from RA patients can be modulated in vitro and PD-L1+ B cells could thus provide new perspectives for future treatment strategies